Microscopía óptica campo claro y fluorescencia

La microscopía de luz transmitida es una técnica clásica para observar estructuras microscópicas. Las secciones teñidas se utilizan frecuentemente y brindan información valiosa en muchos estudios. Otros enfoques de microscopía de luz transmitida, que incluyen técnicas como el contraste de fase, el contraste de interferencia diferencial (DIC) y la microscopía polarizada, mejoran el contraste inherente de las muestras, incluyendo muestras vivas, para hacerlas más visibles.
La microscopía de fluorescencia, usando una variedad de indicadores o sondas fluorescentes, específicas para dianas como proteínas, lípidos o iones, permite evaluar la fisiología celular. El número de sondas disponibles específicas para diferentes componentes celulares o indicadores fisiológicos aumenta constantemente. Otras tinciones fluorescentes o propiedades fluorescentes de muchos materiales proporcionan información valiosa en otros campos fuera de las muestras biológicas. En la microscopía de fluorescencia de campo amplio (wide field), un haz de luz paralelo ilumina simultáneamente la muestra completa (o todo el campo de visión) para excitar (a través del bloque de filtro) el fluoróforo (s) que contiene. La luz de excitación es proporcionada por una bombilla de alta presión de mercurio o xenón y las longitudes de onda requeridas se seleccionan con filtros ópticos específicos. La fluorescencia resultante en la muestra se ve a simple vista o se captura electrónicamente con una cámara, ya que todas las partes de la muestra se ven simultáneamente. Esto resulta una ventaja en muchos casos. Sin embargo, en otros, la óptica de difracción limitada y la proyección inevitable de la luz fuera del plano de foco, en el plano de la imagen de la cámara pueden dar como resultado imágenes de menor contraste y resolución espacial. No obstante, el microscopio de fluorescencia de campo amplio se usa comúnmente y puede usarse satisfactoriamente con secciones delgadas o capas de células individuales.