Espectroscopía de correlación de fluorescencia

La espectroscopia de correlación de fluorescencia (FCS) realiza un análisis de fluctuaciones de intensidad de fluorescencia emitida por moléculas y/o partículas de pequeño tamaño, en solución y/o en células. La fluorescencia emitida es analizada en un volumen muy pequeño de solución donde la intensidad de fluorescencia fluctúa debido al movimiento browniano de las partículas. En otras palabras, el número de partículas en el subespacio definido por el sistema óptico cambia aleatoriamente alrededor del número promedio. FCS es una herramienta analítica muy sensible porque observa un pequeño número de moléculas (concentraciones nanomolares a picomolares) en un pequeño volumen (~ 1μm3). El análisis proporciona el número promedio de partículas fluorescentes y el tiempo promedio de difusión, cuando la partícula está pasando por el espacio. Los experimentos de FCS pueden realizarse en una amplia variedad de especímenes, que van desde la ciencia de los materiales hasta la biología. Debido a que los marcadores fluorescentes vienen en una variedad de colores y pueden unirse específicamente a una molécula particular (por ejemplo, proteínas, polímeros, complejos metálicos, etc.), es posible estudiar el comportamiento de moléculas individuales. Eventualmente, se determinan tanto la concentración como el tamaño de la partícula (molécula) ambos parámetros importantes en numerosos campos de la investigación bioquímica, biofísica, química. En biologia celular, FCS permite la observación de moléculas marcadas con fluorescencia en células vivas intactas, lo que representa una nueva área de "bioquímica in situ o in vivo.